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三葉青快速繁殖方法
作者:匿名
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發(fā)布時(shí)間:2016-12-01 17:35:12

三葉青又名有角烏蘞莓、石老鼠,為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤。主要分布于長(cháng)江以南地區,但多年來(lái)三葉青被毀滅性挖取,種源稀少。筆者應用組織培養進(jìn)行快速繁殖研究,以期解決資源緊缺問(wèn)題。1材料。1.1藥材:試驗材料采自安徽省,外植體取莖尖、帶腋芽的莖段和葉片。1.2培養基:基本培養基為MS按不同處理方案添加不同類(lèi)型的植物激素,用0.1NNaOH和0.1NHCL調節pH值為5.8~6.0,在高壓滅菌鍋中高溫(121℃)滅菌20min。上述培養基均加3%蔗糖、1%瓊脂,培養室溫度25℃左右,每天光照13h,光照強度20001x左右。移栽基質(zhì)經(jīng)過(guò)滅菌消毒處理,按m(珍珠巖):m(草炭):m(菜園土)=1∶1∶1比例混合。2試驗方法與結果。2.1樣品處理:取莖尖、莖段(帶芽)和葉為外植體,按下列程序進(jìn)行消毒:
取材→自來(lái)水粗洗→5%洗衣粉水溶液漂洗5min→自來(lái)水沖洗30min→75%乙醇擦洗表面→0.1%升汞溶液中消毒5min→2%次氯酸鈉溶液中消毒20min→無(wú)菌水沖洗4~6次,然后在無(wú)菌工作臺中將外植體切成0.5~1.0cm長(cháng)的小段。
2.2誘芽培養:分別將不同部位的外植體接種到表1各培養基中,觀(guān)察出芽情況,計算誘芽率。不同植體對愈傷組織誘導不一樣,在由3號培養基的激素濃度配比下試驗結果(見(jiàn)表2)。2.3繼代增殖:將誘導出來(lái)的愈傷組織及芽叢轉到新的3種不同激素組合的培養基上進(jìn)行繼代培養。將初代培養的芽叢分離并切割成2cm的莖段,接種于培養基MS+NAA0.2;MS+6BA0.02+NAA0.5;MS+6BA2+NAA0.2。接種后給予全天光照,室溫20~28℃。1周后腋芽萌動(dòng)且萌蘗生長(cháng)很快。2.4生根培養:不同激素組合對其生根狀況影響較大(表4)。將誘導成活的叢生芽切割成單芽,分別轉接到表3各培養基中(每瓶接1個(gè)芽),30d后4號培養基的生根率最高達74%。2.5移栽定植:芽長(cháng)到3~4cm時(shí),切取健壯的植株轉到生根培養基上,所有的植株都能正常生長(cháng),培養1周后,即誘導出根,10d后每株可長(cháng)出3~5條根,根長(cháng)達4~5cm。再培養1周,植株健壯,葉色濃綠,然后揭去紙蓋練苗。輕輕洗去根部培養基,移到蛭石的小盆中,蓋上塑料膜及燒杯,保持較高的溫度,10d后揭去塑料膜及燒杯,可移栽到大田,小苗成活率95%。3小結。
對三葉青不同部位的外植體進(jìn)行誘導,在相同消毒處理下和同種培養基中,最佳誘導外植體為莖尖。初代培養過(guò)程中以3號培養基為最佳,生根培養基以4號為最佳。BA在三葉青的繼代培養中的作用可以忽略不計,可以認為MS+NAA0.2是最佳組合的繼代增殖培養基。

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